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La coloration de Gram, ou simplement de Gram, est une technique simple et rapide qui vise à différencier les bactéries en fonction des caractéristiques de leur paroi cellulaire après exposition à différents colorants et solutions.
Ainsi, grâce à la coloration de Gram, il est possible de vérifier, en plus de la forme des bactéries, la couleur qu'elles acquièrent, et ce résultat est important pour définir d'autres stratégies d'identification des espèces bactériennes et pour le médecin d'indiquer un traitement préventif selon le caractéristiques observées au microscope.
La coloration de Gram est généralement effectuée en routine en laboratoire et fait partie de l'examen bactérioscopique. Comprenez ce qu'est la bactérioscopie et comment elle est effectuée.
Comment se fait la coloration de Gram
La coloration de Gram est une méthode rapide, pratique et peu coûteuse pour identifier les bactéries responsables des infections, étant utile pour les médecins pour indiquer un traitement préventif de l'infection qui peut survenir, car les caractéristiques spécifiques de ces groupes de bactéries sont connues,
La coloration de Gram se fait en 7 étapes principales, cependant le protocole peut varier en fonction du laboratoire:
- Placer quelques colonies de bactéries sur la lame en ajoutant une goutte d'eau pour faciliter l'homogénéisation des colonies;
- Laissez sécher un peu, et la lame peut passer rapidement à travers la flamme pour favoriser le séchage, cependant il est important de faire attention à la température, car si la température est trop élevée il est possible qu'il y ait un changement dans la structure de la bactérie, ce qui peut interférer avec le résultat l'examen;
- Lorsque la lame est sèche, couvrez avec le colorant cristal violet et laissez agir pendant environ 1 minute;
- Lavez la lame avec un jet d'eau courante et couvrez la lame avec le lugol, qui a pour but de fixer le colorant bleu, et laissez agir 1 minute. Les deux types de bactéries peuvent absorber le complexe formé par le colorant et le lugol, devenant bleu;
- Ensuite, lavez la lame à l'eau courante et appliquez de l'alcool à 95% en la laissant agir pendant 30 secondes. L'alcool est responsable de la dissolution de la membrane lipidique qui forme les bactéries à Gram négatif et, ainsi, de l'élimination du complexe formé entre le colorant et le lugol, décolorant ces bactéries. Cependant, dans le cas des bactéries à Gram positif, l'alcool déshydrate la paroi cellulaire des bactéries à Gram positif, provoquant la contraction des pores et les rendant imperméables;
- Ensuite, lavez à nouveau à l'eau courante et couvrez la lame avec le deuxième colorant, la fuchsine ou la safranine et laissez agir pendant 30 secondes;
- Ensuite, lavez la lame sous l'eau courante et laissez sécher à température ambiante.
Dès que la lame est sèche, il est possible de mettre une goutte d'huile d'immersion et d'observer la lame au microscope avec un objectif 100x, permettant de vérifier la présence ou l'absence de bactéries, ainsi que la présence de levures et de cellules épithéliales.
Pourquoi est-ce
La coloration de Gram a pour objectif principal de différencier les bactéries en fonction des caractéristiques de la paroi cellulaire et de la morphologie générale. Ainsi, selon les caractéristiques observées au microscope, les bactéries peuvent être classées en:
- Les bactéries à Gram positif, qui sont visualisées avec une couleur bleue en raison du fait qu'elles ne sont pas décolorées par l'alcool, car elles ont une paroi cellulaire plus épaisse et leurs pores se resserrent lorsqu'ils sont exposés au lugol;
- Bactéries à Gram négatif, qui sont visualisées avec une couleur rose / violette en raison du fait qu'elles sont décolorées par l'alcool et colorées par la safranine ou la fuchsine.
Après avoir observé les bactéries au microscope, il est possible que d'autres tests soient effectués en laboratoire pour identifier l'espèce de la bactérie. Cependant, grâce au Gram et à l'association avec les signes et symptômes présentés par la personne, le médecin peut indiquer un traitement préventif jusqu'à ce que le résultat d'examens plus spécifiques soit disponible, car il est ainsi possible de réduire le taux de réplication bactérienne et de prévenir les complications.